Полиакриламиддик гель электрофорез
Гель электрофорези – бул ДНК, РНК жана белоктор сыяктуу макромолекулаларды бөлүүгө мүмкүндүк берүүчү биологиялык дисциплиналардагы лабораториялардагы негизги ыкма. Ар кандай бөлүү каражаттары жана механизмдери бул молекулалардын бөлүктөрүн алардын физикалык өзгөчөлүктөрүн колдонуу менен натыйжалуураак бөлүүгө мүмкүндүк берет. Айрыкча белоктор үчүн полиакриламиддик гел электрофорези (PAGE) көбүнчө тандоо ыкмасы болуп саналат.
PAGE – белоктор сыяктуу макромолекулаларды электрофоретикалык мобилдүүлүккө, башкача айтканда, аналитиктердин карама-каршы заряддагы электродго карай жылышына жараша бөлүүчү ыкма. PAGEде бул молекуланын заряды, өлчөмү (молекулярдык салмагы) жана формасы менен аныкталат. Аналиттер полиакриламиддик гелде пайда болгон тешикчелер аркылуу жылат. ДНК менен РНКдан айырмаланып, протеиндер камтылган аминокислоталарга жараша жооптуу болуп, алардын иштешине таасир этет. Амино-кислота саптары, ошондой эле алардын көрүнөө өлчөмүнө жана натыйжада, тешикчелер аркылуу кантип жыла аларына таасир этүүчү экинчи структураларды түзүшү мүмкүн. Ошондуктан, кээде өлчөмүн так баалоо талап кылынса, аларды сызыктуу кылуу үчүн электрофорезге чейин протеиндерди денатурациялоо туура болушу мүмкүн.
SDS PAGE
Натрий-додецилсульфат полиакриламиддик гель электрофорези 5тен 250 кДага чейинки массадагы белок молекулаларын бөлүү үчүн колдонулган ыкма. Белоктор молекулалык салмагына жараша гана бөлүнөт. Белок үлгүлөрүнүн ички заряддарын маска кылган жана аларга масса катышына окшош заряд берген гелдерди даярдоодо аниондук беттик активдүү зат болгон натрий додецил сульфаты кошулат. Жөнөкөй сөз менен айтканда, белокторду денатурациялайт жана аларга терс заряд берет.
Native PAGE
Native PAGE - белокторду бөлүү үчүн денатураланбаган гелдерди колдонгон ыкма. SDS PAGEден айырмаланып, гелдерди даярдоодо денатурациялоочу агент кошулбайт. Натыйжада белоктордун бөлүнүшү белоктордун зарядына жана өлчөмүнө жараша ишке ашат. Бул ыкмада белоктордун конформациясы, бүктөлүшү жана аминокислота чынжырлары бөлүнүүнүн көз каранды факторлору. Бул процессте белоктор бузулбайт жана бөлүү аяктагандан кийин калыбына келтирилиши мүмкүн.
Полиакриламиддик гел электрофорези (PAGE) кантип иштейт?
PAGEнин негизги принциби аналиттерди электр тогунун жардамы менен полиакриламиддик гелдин тешиктеринен өткөрүү жолу менен бөлүп алуу болуп саналат. Бул үчүн, акриламид-бисакриламид аралашмасы аммоний персульфатын (APS) кошуу менен полимерлештирет (полиакриламид). Тетраметилэтилендиамин (TEMED) менен катализделген реакция аналиттер кыймылдай турган тешикчелери бар тор сымал структураны түзөт (2-сүрөт). Гельге кирген жалпы акриламиддин пайызы канчалык жогору болсо, тешикчелердин көлөмү ошончолук кичине болот, демек, протеиндер ошончолук азыраак өтөт. Акриламид менен бисакриламиддин катышы тешикчелердин өлчөмүнө да таасирин тийгизет, бирок бул көбүнчө туруктуу сакталат. Кичинекей тешикчелердин өлчөмдөрү ошондой эле кичинекей протеиндердин гел аркылуу жылып өтүү ылдамдыгын азайтып, алардын резолюциясын жакшыртат жана ток колдонулганда буферге тез агып кетүүсүнө жол бербейт.
Полиакриламиддик гель электрофорез үчүн жабдуулар
Гель электрофорез клеткасы (танк/камера)
Полиакриламиддик гель электрофорези (PAGE) үчүн гель багы агароз гелинин резервуарынан айырмаланат. Агароз гелинин резервуары горизонталдуу, ал эми PAGE танкы вертикалдуу. Вертикалдуу электрофорез клеткасы (бак/камера) аркылуу эки айнек пластинканын ортосуна жука гель (кадимки 1,0 мм же 1,5 мм) куюлат жана гелдин түбү бир камерадагы буферге, ал эми үстү буферге чөмүлүп калгыдай кылып орнотулат. башка палатада. Ток колдонулганда, аз өлчөмдө буфер гел аркылуу үстүнкү камерадан төмөнкү камерага өтөт. Курамдын тик абалда болушун кепилдөө үчүн күчтүү кычкачтар менен жабдуу гельдин тез иштешин бир калыпта муздатып, натыйжада айырмаланган тилкелерди пайда кылат.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) полиакриламиддик гел электрофорез клеткаларынын бир катар өлчөмдөрүн (цистерналар/камералар) өндүрөт. DYCZ-20C жана DYCZ-20G моделдери ДНК секвенирлөө анализи үчүн тик электрофорез клеткалары (танктар/камералар) болуп саналат. Кээ бир вертикалдык электрофорез клеткалары (цистерналар/камералар) DYCZ-24DN, DYCZ-25D жана DYCZ-25E модели сыяктуу, блоттинг системасы менен шайкеш келет, DYCZ-40D, DYCZ-40G жана DYCZ-40F үлгүлөрү менен шайкеш келет, белок молекуласын гелден мембранага өткөрүү үчүн колдонулат. SDS-PAGE электрофорезинен кийин, Western Blotting протеин аралашмасындагы белгилүү бир протеинди аныктоо ыкмасы. Сиз эксперименталдык талаптарга ылайык бул тазалоо системаларын тандай аласыз.
Электрофорез менен жабдуу
гелди иштетүү үчүн электр менен камсыз кылуу үчүн, электрофорез электр булагы керек болот. Liuyi Biotechnology компаниясында биз бардык колдонмолор үчүн электрофорездин электр булактарын камсыздайбыз. Модели DYY-12 жана DYY-12C жогорку туруктуу чыңалуу жана ток менен жогорку чыңалуу талабын электрофорезге жооп бере алат. Ал стенд, убакыт, VH жана этап-этабы менен колдонуу функциясына ээ. Алар IEF жана ДНК секвенирлөөчү электрофорезди колдонуу үчүн идеалдуу. жалпы белок жана ДНК электрофорез колдонуу үчүн, биз модели DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, ж.б., ошондой эле электрофорез клеткалары (танктар / камералар) менен ысык сатуу энергия булактары бар. Булар орто жана төмөнкү чыңалуудагы электрофорезге колдонулушу мүмкүн, мисалы, мектеп лабораториясында, оорукана лабораториясында жана башкалар. Электр жабдыктары үчүн көбүрөөк моделдер, биздин веб-сайтка кириңиз.
Liuyi брендинин Кытайда 50 жылдан ашык тарыхы бар жана компания бүткүл дүйнө жүзү боюнча туруктуу жана сапаттуу өнүмдөрдү бере алат. Көп жылдык өнүгүү аркылуу ал сиздин тандооңузга татыктуу!
Биз жөнүндө көбүрөөк маалымат алуу үчүн электрондук почта аркылуу биз менен байланышыңыз[email protected] or [email protected].
Полиакриламиддик гел электрофорез деген эмне?
1. Карен Стюард PhD Полиакриламиддик гель электрофорези, ал кантип иштейт, техниканын варианттары жана анын колдонулушу
Посттун убактысы: 23-май-2022