Эксперимент принциби
Гемоглобин электрофорези ар кандай нормалдуу жана анормалдуу гемоглобиндерди аныктоого жана тастыктоого багытталган.
Белгилүү бир рН буфердик эритмеде гемоглобиндин изоэлектрдик чекити буфердик эритменин рНынан төмөн болгондо, гемоглобиндин заряды жана изоэлектрдик чекити ар кандай гемоглобин типтеринин ар түрдүү заряддарына жана изоэлектрдик чекиттерине байланыштуу электрофорез учурунда терс заряд алып, анод тарапка жылат. Тескерисинче, оң заряддуу гемоглобин катодду көздөй жылат.
Белгилүү бир чыңалуу астында жана белгилүү бир электрофорез убакытынан кийин, заряды жана молекулалык салмагы ар кандай гемоглобиндер ар кандай миграция багыттарын жана ылдамдыгын көрсөтөт. Бул ар кандай гемоглобиндердин санын аныктоо үчүн бул зоналар боюнча кийинчерээк колориметриялык же электрофоретикалык сканерлөө анализин жүргүзүүгө мүмкүндүк берет. Эң көп колдонулган ыкма рН 8,6 целлюлоза ацетаты мембраналык электрофорез.
Цитоплазманын ичинде гликоген же полисахариддик заттарда (мисалы, мукополисахариддер, мукопротеиндер, гликопротеиндер, гликолипиддер ж. б.) бар этиленгликоль топтору (CHOH-CHOH) мезгилдүү кислота менен кычкылданат жана альдегид топторуна (CHO-CHO) айланат. Бул альдегид топтору түссүз кызгылт-кызыл Шифф реагенти менен биригип, кызгылтым-кызыл боёкту пайда кылып, клеткада полисахариддер бар жерлерге топтолот. Бул реакция мурда гликогендик боёо деп аталган мезгилдүү кислота-Шиф (PAS) боёосу деп аталат.
Эксперимент ыкмасы
Материалдар:Целлюлоза ацетатымемbrane, электрофорез аппараты(DYCP-38C жана электр менен камсыздоо DYY-6C), Үлгү жүктөө куралы(пипетка), спектрофотометр, колориметриялык кюветтер, буферлер.
Буфер:
(1) pH 8,6 TEB буфери: 10,29 г Трис, 0,6 г EDTA, 3,2 г бор кислотасын таразалап, 1000 млге дистилденген суу кошуңуз.
(2) Борат буфери: 6,87 г бурак жана 5,56 г бор кислотасын таразалап, 1000 млге дистилденген сууну кошуңуз.
Процедура:
PГемоглобин эритмесин калыбына келтирүү
Антикоагулянт катары гепарин же натрий цитраты бар 3 мл канды алыңыз. 10 мүнөткө 2000 айн/мин центрифугалоо жана плазманы жок кылуу. Эритроциттерди физиологиялык туз менен үч жолу жууп (750 айн/мин, ар бир жолу 5 мүнөт центрифугалоо). 10 мүнөткө 2200 айн/мин центрифугалап, үстүнкү затты таштаңыз. бирдей өлчөмдө дистилденген сууну кошуп, андан кийин төрт хлордуу көмүртектин көлөмүн 0,5 эсеге кошуңуз. 5 мүнөт катуу чайкап, андан кийин Hb жогорку эритмени кийинчерээк колдонуу үчүн чогултуу үчүн 2200 айн/мин ылдамдыкта 10 мүнөт центрифугалаңыз.
Мембрананы суулоо
Целлюлоза ацетат мембранасын 3 см × 8 см өлчөмүндөгү тилкелерге кесиңиз. Аларды pH 8,6 TEB буферине толук каныкканга чейин чылап, андан кийин алып салыңыз жана фильтр кагазы менен кургатып алыңыз.
Тактоо
Пипетка менен 10 мкл гемоглобин эритмесин вертикалдуу түрдө целлюлоза ацетаты мембранасына (орой жагы), четинен 1,5 см алыстыкта тактоо керек.
Электрофорез
Электрофорез камерасына борат буфердик эритмени куюңуз. Целлюлоза ацетаттык кабыкчасын камеранын катоддук учуна так жагы менен коюңуз. 200 В чыңалуусунда 30 мүнөт иштетиңиз.
Элюция
HbA жана HbA2 зоналарын кесип, өзүнчө пробиркаларга салып, 15 мл жана 3 мл дистилденген сууну кошобуз. Гемоглобинди толугу менен сүзүү үчүн акырын чайкап, андан соң аралаштырыңыз.
Колориметрия
Элюция эритмеси үчүн дистилденген сууну колдонуу менен абсорбенцияны нөлгө түшүрүңүз жана абсорбенцияны 415 нмде өлчөңүз.
Эсептөө
HbA2(%) = HbA2 түтүгүнүн абсорбциясы / (HbA түтүгүнүн абсорбциясы × 5 + HbA2 түтүгүнүн абсорбциясы) × 100%
Эксперименттик натыйжаларды эсептөө
pH 8,6 TEB буфердик целлюлоза ацетаты электрофорез үчүн маалымдама диапазону: HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%
Эскертүүлөр
Электрофорездин убактысы өтө көп болбошу керек. Электрофорез учурунда целлюлоза ацетаттык кабыкчасы кургабашы керек. HbA жана HbA2 так бөлүнгөндө электрофорезди токтотуңуз. Узакка созулган электрофорез зоналык диффузияны жана бүдөмүктүктү алып келиши мүмкүн.
Өтө көп үлгүнү колдонуудан качыңыз. Ашыкча гемоглобин суюктугу лентадан ажырап же жетишсиз боёп, HbA деңгээлинин жалган жогорулашына алып келиши мүмкүн.
Целлюлоза ацетаттык кабыкчасынын белоктор менен булганышын болтурбоо.
ток өтө жогору болбошу керек; антпесе, гемоглобин тилкелери бөлүнбөй калышы мүмкүн.
Ар дайым кадимки адамдардан алынган үлгүлөрдү жана керектүү белгилүү анормалдуу гемоглобиндерди контролдоочу каражат катары кошуңуз.
Beijing Liuyi Biotechnology модели болуп саналат гемоглобин электрофорез үчүн кесиптик электрофорез танк өндүрөтDYCP-38Cцеллюлоза ацетаты мембраналык электрофорез цистернасы жана целлюлоза ацетаты мембраналык электрофорез резервуары үчүн электрофорездин электр менен камсыздоонун эки модели барDYY-2CжанаDYY-6Cэлектр камсыздоо.
Ошол эле учурда, Пекин Liuyi Biotechnology кардарлар үчүн целлюлоза ацетат мембрана менен камсыз кылат, жана целлюлоза ацетат кабыкчасынын өлчөмү ылайыкташтырылышы мүмкүн. Бизден үлгүлөрдү жана көбүрөөк маалымат сурап коюңуз.
Beijing Liuyi брендинин Кытайда 50 жылдан ашык тарыхы бар жана компания бүткүл дүйнө жүзү боюнча туруктуу жана сапаттуу өнүмдөрдү бере алат. Көп жылдык өнүгүү аркылуу, ал сиздин тандооңузга татыктуу!
Биз азыр өнөктөштөрдү издеп жатабыз, эки OEM электрофорез танк жана дистрибьюторлор тосуп жатышат.
Биздин өнүмдөрдү сатып алуу планыңыз болсо, биз менен байланышуудан тартынбаңыз. Сиз бизге электрондук почта аркылуу билдирүү жөнөтө аласыз[email protected]же[email protected], же +86 15810650221 номерине чалыңыз же Whatsapp +86 15810650221 же Wechat кошуңуз: 15810650221
Посттун убактысы: 20-сентябрь-2023